Exportar este item: EndNote BibTex

Use este identificador para citar ou linkar para este item: http://tede.unicentro.br:8080/jspui/handle/jspui/688
Tipo do documento: Dissertação
Título: A EXPOSIÇÃO PERINATAL AO BISFENOL A DURANTE O PERÍODO DA DIFERENCIAÇÃO SEXUAL HIPOTALÂMICA MODULA A EXPRESSÃO TESTICULAR DE GENES RELACIONADOS À ESPERMATOGÊNESE
Autor: CAMPOS, PATRÍCIA DE 
Primeiro orientador: Romano, Marco Aurélio
Primeiro coorientador: Romano, Renata Marino
Resumo: O aumento da incidência de distúrbios reprodutivos do sexo masculino tem atraído preocupações sobre o impacto dos desreguladores endócrinos químicos (DEQs) sobre a saúde reprodutiva, especialmente quando essa exposição ocorre durante a vida fetal. Bisfenol A (BPA) é um DEQ com atividade estrogênica reconhecida, que é amplamente utilizada na fabricação de plásticos e de revestimento internos de latas de alimentos. Estudos realizados anteriormente demonstraram comprometimento no processo da espermatogênese em ratos machos expostos ao BPA na idade adulta. Desta forma, o objetivo deste estudo foi investigar a toxicidade reprodutiva na prole masculina adulta de mães expostas ao BPA durante o período perinatal do 18º dia gestacional até o 5º dia pós-natal (DPN), que é reconhecido como a janela de diferenciação sexual do hipotálamo em ratos. Durante este período, as fêmeas foram tratadas uma vez por dia com zero, 0,5 ou 5 mg por kg de peso corporal, por via subcutânea, de BPA diluído em óleo de milho. No DPN90, a prole masculina foi submetida à eutanásia e os tecidos foram coletados para avaliar: a) a produção espermática através da contagem de espermatozoides do testículo; b) as reservas espermáticas através da contagem de espermatozoides do epidídimo; c) o tempo de trânsito espermático dividindo a reserva espermática pela produção de espermatozoides; d) a avaliação funcional dos espermatozoides coletados da cauda do epidídimo (integridade acrossômica pelo método de coloração POPE, integridade da membrana plasmática pelo método de eosina-nigrosina, atividade mitocondrial pela medição do citocromo c oxidase na peça intermediária do espermatozoide, e morfologia após fixação em solução de formol salina tamponada); e) a histologia do epitélio seminífero em secções microscópicas dos testículos fixados em solução de Bouin e corados com ácido periódico de Schiff (PAS); f) a expressão da transcrição do de andrógeno (Ar), receptor de estradiol α (Esr1), receptor de estradiol β (Esr2), receptor de estrógeno α acoplado a proteína G (Gper) e citocromo P450 da família 19, subfamília A, polipeptídeo 1 (Cyp419a1) nos testículos através da transcrição reversa seguida de PCR quantitativa (qPCR-RT); e g) a dosagem hormonal sérica de testosterona por eletroquimioluminescência. Os dados paramétricos foram analisados usando ANOVA seguido pelo pós teste de Tukey-HSD e dados não-paramétricos foram analisados por meio de teste de Kruskal-Wallis seguido do pós teste de Dunn com recursos do programa Statistica 7,0 (Statsoft, Inc). As diferenças estatísticas foram consideradas quando p <0,05. A exposição ao BPA durante o desenvolvimento perinatal reduziu a produção espermática total e diária na prole adulta. Alterações morfológicas do epitélio seminífero também ocorreram em ambos os grupos tratados com BPA, com uma diminuição na altura do epitélio e um aumento no diâmetro luminal. O tempo de trânsito dos espermatozoides e reservas espermáticas aumentaram em ambos os grupos tratados com BPA. A funcionalidade dos espermatozoides só foi afetada no grupo tratado com 5 mg / kg de BPA, com redução da integridade do acrossoma e da membrana plasmática, bem como a redução da atividade mitocondrial e aumento de anormalidades morfológicas. O padrão de expressão de genes relacionados com o processo da espermatogênese foi alterado apenas no grupo tratado com 5 mg/ kg de BPA, com redução de mRNA de Ar e aumento de mRNA de Esr1. Não foram observadas alterações significativas nos mRNAs de Cyp419a1, Esr2 ou Gper. A dosagem sérica de testosterona foi aumentada no grupo tratado com 5 mg/ kg de BPA. A redução da altura do epitélio seminífero está possivelmente relacionada com a diminuição da produção espermática. BPA causou um acúmulo de espermatozoides nos segmentos do epidídimo através do aumento do tempo de trânsito dos espermatozoides, o que é evidenciado pelo aumento das reservas espermáticas em ambos os grupos tratados. Em animais expostos a uma maior dose aumentou os níveis de testosterona e reduziu a expressão de mRNA de Ar, o que pode influenciar negativamente na resposta da testosterona sobre as células de Sertoli. Como resultado da perturbação da espermatogênese, todos os parâmetros de função espermática foram comprometidos, sugerindo um possível prejuízo na capacidade de fecundação destes espermatozoides. Em conclusão, a exposição as doses de 0,5 e 5 mg/Kg de peso corporal/dia de BPA durante o período de diferenciação sexual do hipotálamo produz efeitos deletérios sobre a espermatogênese na prole adulta.
Abstract: The increased incidence of male reproductive disorders has attracted concerns about the impact of endocrine disrupting chemicals (EDCs) on reproductive health, especially when such exposure occurs during fetal life. Bisphenol A (BPA) is a EDC with recognized estrogenic activity, which is widely used in the manufacture of plastics and inner lining of food cans. Studies conducted previously demonstrated compromising in the spermatogenesis process in male rats exposed to BPA in adulthood. In this manner, the aim of this study was to investigate the reproductive toxicity in adult male offspring of dams exposed to BPA during the perinatal period from gestational day 18 to postnatal day (PND) 5, which is recognized as the hypothalamic sexual differentiation window. During this period, the dams were treated once a day with zero, 0.5 or 5 mg per kg of body weight, subcutaneously, of BPA diluted in corn oil. In PND90, the male offspring was euthanized and tissues were collected to evaluate the a) sperm production by counting the testicular sperm; b) sperm reserves by counting the epididymal sperm; c) sperm transit time by dividing sperm reserves by sperm production; d) functional evaluation of spermatozoa collected from cauda epididymis (acrosome integrity by Pope staining method, plasma membrane integrity by eosin-nigrosin staining method, mitochondrial activity by measuring cytochrome c oxidase activity in the mid-piece of sperm, and morphology after buffered formal-saline solution fixation); e) histology of the seminiferous epithelium in microscopic sections of testis fixed in Bouin’s solution and stained with periodic-acid-schiff (PAS); f) transcript expression androgen receptor (Ar), α estradiol receptor (Esr1), β estradiol receptor (Esr2), α estrogen receptor G protein coupled (Gper) and cytochrome P450 family 19, subfamily a, polypeptide 1 (Cyp419a1) in the testis by reverse transcription followed by quantitative PCR (RT-qPCR); and g) serum hormonal dosages of testosterone by electrochemiluminescence. Parametric data were analyzed using ANOVA followed by Tukey-HSD posthoc test and non-parametric data were analyzed using Kruskal-Wallis followed by Dunn’s posthoc test with resources of the software Statistica 7.0 (Statsoft Inc). Statistical differences were considered when p <0.05. BPA exposure during the perinatal development reduced total and daily sperm production in the adult male offspring. Morphological changes in the seminiferous epithelium also affected in both BPA treated groups, with a decrease in epithelium height and an increase in luminal diameter. The sperm transit time and sperm reserves increased in both BPA treated groups. The functionality of the sperm was only affected in the group treated with 5 mg of BPA/kg, with reduction in the integrity of acrosome and plasme membrane as well as reduced mitochondrial activity and increased morphological abnormalities. The pattern of expression of genes related to spermatogenesis process was altered only in the group treated with 5 mg of BPA/kg, with reduction in Ar mRNA and increasing in Esr1 mRNA. No significant alterations were observed in Cyp419a1, Esr2 or Gper mRNAs. The serum dosage of testosterone was increased in the group treated with 5 mg of BPA/kg. The reduction in the seminiferous epithelial height is possible related with the decrease in the sperm production by the testis. BPA caused an accumulation of sperm in the epididymis segments by increased the sperm transit time, which is evidenced by the increase in sperm reserves in both treated groups. In animals exposed to a higher dose increased testosterone levels and reduced Ar mRNA expression, which may negatively influence the response of testosterone on Sertoli cells. As result of disturbed spermatogenesis, all parameters of spermatic function were compromised, suggesting a possible impairment in the fecundation ability of this sperm. In conclusion, that exposure to doses 0,5 e 5 mg/ kg body weight/day of BPA during the hypothalamic sexual differentiation period produces deleterious effects on spermatogenesis in adult offspring.
Palavras-chave: Bisfenol A
Expressão gênica
Parâmetros espermáticos
Bisphenol A
Gene expression
Sperm parameters
Área(s) do CNPq: CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade Estadual do Centro-Oeste
Sigla da instituição: UNICENTRO
Departamento: Unicentro::Departamento de Farmácia
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas (Mestrado / Associação Ampla com UEPG)
Citação: CAMPOS, PATRÍCIA DE. A EXPOSIÇÃO PERINATAL AO BISFENOL A DURANTE O PERÍODO DA DIFERENCIAÇÃO SEXUAL HIPOTALÂMICA MODULA A EXPRESSÃO TESTICULAR DE GENES RELACIONADOS À ESPERMATOGÊNESE. 2016. 65 f. Dissertação (Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas - Mestrado / Associação Ampla com UEPG) - Universidade Estadual do Centro-Oeste, Guarapuava - PR.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://tede.unicentro.br:8080/jspui/handle/jspui/688
Data de defesa: 17-Fev-2016
Aparece nas coleções:Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas

Arquivos associados a este item:
Arquivo Descrição TamanhoFormato 
PATRÍCIA DE CAMPOS.pdfPATRÍCIA DE CAMPOS1,97 MBAdobe PDFThumbnail

Baixar/Abrir Pré-Visualizar


Os itens no repositório estão protegidos por copyright, com todos os direitos reservados, salvo quando é indicado o contrário.